大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞是來源于脂肪組織的干細胞，與其它成體干細胞一樣具有自我更新和多向分化的能力。人和鼠的脂肪組織均可用于分離ADSCs，其中鼠脂肪組織通常取自腹股溝處脂肪墊。
大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞的實驗步驟：
1、10天齡到4周齡大鼠1只，麻醉處死，75%乙醇浸泡消毒3~5min。無菌條件下切開腹股溝皮膚，暴露腹股溝脂肪墊。
2、鈍性剝離脂肪組織，清洗并去除筋膜組織及小血管。將脂肪墊剪碎，轉移至15mL離心管中。
3、加入3~4倍體積的0.1%I型膠原酶溶液，37℃水浴振蕩約20min，直至細胞混合物成乳狀濃稠液體。期間可吹打脂肪組織，輔助消化。
4、250×g，4℃，離心5min。注意離心機預冷至4℃。
5、小心吸去上層油脂，注意不要破壞位于下方的膠狀沉淀。加人5mL*培養(yǎng)基，重懸沉淀，轉移到新的離心管中，再次離心5min。
6、重復洗滌一次，吸去上清。
7、加入8mL*培養(yǎng)基重懸沉淀，轉移至T25培養(yǎng)瓶中，置于37℃，5%CO2溫箱中。
8、待細胞貼壁生長48h后初次觀察、換液。
9、換液時通過棄去培養(yǎng)基，從而去除未貼壁的細胞。
10、以后每兩天更換一次培養(yǎng)基，細胞匯合達80%-90%時，0.25%胰蛋白酶消化，按1:2或1:3比例首次傳代。
大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞注意事項：
1、取材時應將組織清洗干凈，仔細剝離去除血管和筋膜組織。
2、脂肪組織在剪碎的過程中不能研磨，以免破壞細胞。
3、消化完后的組織在離心前把離心機預冷，使細胞更好的與油脂分離。
4、用明膠或者膠原蛋白處理培養(yǎng)皿底壁，有利于細胞的貼壁生長。
更新時間：2022-08-18
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